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胰酶消化液(含EDTA)

简要描述:

胰酶消化液(含EDTA)胰蛋白酶(trypsin,胰酶)使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解,导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。而乙二胺四乙酸二钠(EDTA)通过与二价钙、镁离子结合,也能使细胞分散。所以胰酶(含EDTA或不含EDTA)的消化液常用于细胞生物学研究中分离贴壁细胞。本产品特点如下:
1. 含EDTA和不含EDTA两种规格(90306A含,9

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胰酶消化液(含EDTA)

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胰酶消化液(含EDTA)

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胰蛋白酶(trypsin,胰酶)使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解,导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。而乙二胺四乙酸二钠(EDTA)通过与二价钙、镁离子结合,也能使细胞胰酶消化液(含EDTA)分散。所以胰酶(含EDTA或不含EDTA)的消化液常用于细胞生物学研究中分离贴壁细胞。本产品特点如下:
1. 含EDTA和不含EDTA两种规格(90306A含,90306B不含)。
2. 本产品经过过滤除菌,即开即用,非常方便。
3. 可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。
4. 高效,通常室温消化1分钟左右就可以消化大多数贴壁细胞。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,胰酶消化液(含EDTA)离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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