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淋巴细胞分离液A型(人)

简要描述:

淋巴细胞分离液A型(人)本产品是基于聚蔗糖(Ficoll 400)和泛影葡胺的混合物,专门用于离心法分离人血液单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)的标准溶液。它具有下列特点:
1. 即开即用,非常方便。

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淋巴细胞分离液A型(人)

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淋巴细胞分离液A型(人)

100mL

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本产品是基于聚蔗糖(Ficoll 400)和泛影葡胺的混合物,专门用于离心法分离人血液单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)的标准溶液。它具有下列特点:
1. 即开即用,非常方便。
2. 具有低粘度、低渗透压、无毒特点。
3. 使用简单,将本产品放置在管底层,铺上抗凝全血后低速离心后即可。吸取血浆层和分离液界面的白膜状条带,该层细胞洗涤去除血小板得到纯净的单个核细胞。红细胞和多核粒细胞密度大于分层液而沉积于管底。
4. 纯度高,所得单核粒细胞纯度~95%,淋巴细胞纯度90~95%,
5. 回收率约80%以上。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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