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一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)

简要描述:

一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)TUNEL全称末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling),它是一种高灵、敏度、快速检测细胞凋亡的方法。其原理是在发生凋亡细胞中会有大量的具有切口的DNA片段、或具有游离3'-OH端、长度是180-200 bp倍数的DNA片段, TdT(Terminal Deoxynucleo

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一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)

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一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)

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980元

 

TUNEL全称末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling),它是一种高灵、敏度、快速检测细胞凋亡的方法。其原理是在发生凋亡细胞中会有大量的具有切口的DNA片段、或具有游离3'-OH端、长度是180-200 bp倍数的DNA片段, TdT(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, 末端脱氧核苷酸转移酶)可以以不依赖模板的方式进行标记,如参入荧光素、生物素或等标记的dUTP,而正常细胞DNA几乎没有游离的3'-OH和切口,所以通过对标记物的显色反应和荧光显微镜或流式细胞仪检测就可以区分正常和凋亡的细胞。本试剂盒有如下特点:
1. 一站式,不需要额外准备专用的试剂(但客户还是需要自备常规的试剂,如水、PBS和细胞涂片所需试剂)。
2. 高灵敏度,可以在单细胞水平检测到细胞凋亡,适合检测早期的细胞凋亡。
3. 特异性高,只标记凋亡细胞,而不标记坏死细胞。
4. 快速,整个操作过程仅需1-2个小时即可完成。
5. 方便,一步染色反应,洗涤后即可观察,不必使用二抗等进行多步操作。
6. 适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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