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萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

简要描述:

萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒报告基因检测是真核基因表达调控研究的常用方法。由于检测光量子的方法非常敏感,采用生物发光(bioluminescent)法,是报告基因检测较常用的有效手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素(luciferin)的转化,发射出光子。萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)催化的发光反应,具有很好的线性浓度范围(7~8个数量级),酶的检测灵敏

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萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

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报告基因检测是真核基因表达调控研究的常用方法。由于检测光量子的方法非常敏感,采用生物发光(bioluminescent)法,是报告基因检测最常用的有效手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素(luciferin)的转化,发射出光子。萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)催化的发光反应,具有很好的线性浓度范围(7~8个数量级),酶的检测灵敏度达到10-18~10-20 mol。本试剂盒采用通用裂解缓冲液(Universal Lysis Buffer,ULB),能与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容;优化的酶反应体系,使发光反应持续数十分钟,以便于手工操作多个样品。可与海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒共同使用,进行一体化的双荧光素酶检测。该产品特点如下:
1.  高度灵敏:可检测10-18~10-20 mol萤火虫荧光素酶
2.  线性范围宽:线性范围达到7~8个数量级
3.  快速简便:特别适合于高通量筛选
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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