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ATCC细胞

简要描述:

ATCC细胞:70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶特点:细胞代数为4-5代左右包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书细胞来源:ATCC。细胞特性:1、细胞活力原代取材活力≥90产品复苏率≥60培养两天就能清晰看到轴突与树突,培养时间可长达13-16天。

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70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶特点:细胞代数为4-5代左右包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书细胞来源:ATCC。细胞特性:1、细胞活力原代取材活力≥90产品复苏率≥60培养两天就能清晰看到轴突与树突,培养时间可长达13-16天。

本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法,利用Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化底物Luciferin(荧光素)的转化,高效利用ATP的能量,发射出光子。发光信号与存在的ATP量呈正比,而ATP与存在于培养基中的细胞数目直接呈正比。ATP的检测灵敏度达到10-13 ,故具有极高的敏感性。本试剂盒首先利用荧光素酶反应体系,测定样品中ATP的发光值,然后用ATP转换酶将ADP转化成ATP,再次利用同样的发光体系,测定样品中ADP转化所得的发光值。获得的结果可提供样品中ADP和ATP的相对含量及其变化,从而了解酶促反应的进程或细胞状态的改变。该产品特点如下:
1.  高度敏感:灵敏度达到10-13 
2.  快速简便:适合高通量筛选
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,ADP/ATP发光法细胞活力检测试剂盒离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。

正在培养中的应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,培养基的PH是否太酸或太碱(由酚红指示剂指示),此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。

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