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天净沙DNA甲基化修饰试剂盒

简要描述:

天净沙DNA甲基化修饰试剂盒本产品是亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒(CAT#:100922)的升级版,亚硫酸氢盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态,反应还必须在低温进行,常规的修饰试剂盒由于是在液相进行,要在低温下让DNA不相互复性而保持单链状态非常棘手,所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外,常规方法要切换反应液,有多次沉淀步骤,使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点,本公司开

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天净沙DNA甲基化修饰试剂盒

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天净沙DNA甲基化修饰试剂盒

150次

1990元

 

本产品是亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒(CAT#:100922)的升级版,亚硫酸氢盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态,反应还必须在低温进行,常规的修饰试剂盒由于是在液相进行,要在低温下让DNA不相互复性而保持单链状态非常棘手,所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外,常规方法要切换反应液,有多次沉淀步骤,使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点,本公司开发出了此升级产品,它具有下列特点:
1. 用包埋的样品进行所有操作,免去所有沉淀和纯化步骤,极大简化了操作。
2. 免去了DNA提取过程,所需实验材料比常规方法更少,最少几个细胞都可以,极大地节约了宝贵材料,尤其适用于珍稀材料。
3. 包埋处理后,DNA在整个操作过程中都处于最适于修饰的单链状态,极大提高了修饰效率。
4. DNA包埋于包埋块中,切换反应液非常方便,而且DNA不会丢失,所以最终回收率都在90%以上。
5. 适用于实体材料、悬浮细胞和纯化好的DNA样品。
6.  本试剂盒足够制备150多个10uL包埋块(如果用纯化好的DNA)或25个10uL包埋块(如果用悬浮细胞)。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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